Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии

Следует заметить, что существуют антигены, которые разрушаются при тепловом демаскировании (например, эпитоп ламинина, выявляемый моноклональными мышиными антителами 4С7).

Для срезов, полученных с объектов, фиксированных в коагулирующих фиксаторах и в фиксирующих жидкостях сложного состава, эффект теплового демаскирования не столь очевиден, как для материала, фиксированного в формалине и цинк-формалине. В отдельных случаях использование высокочувствительных систем детекции позволяет обойтись без теплового демаскирования и получить результаты высокого качества с меньшими временными затратами. Если есть подозрение, что фиксация объектов производилась не в оптимальном режиме (длительная фиксация в растворе формалина, приготовленного «на глаз», и т. п.), обязательно тепловое демаскирование.

Эффективность процедуры теплового демаскирования антигенов удобно контролировать, параллельно с изучаемой серией предметных стекол производя обработку положительного контроля, в котором имеются пролиферирующие клетки (любой лимфатический узел и т. п.). После демаскирования на этом препарате необходимо поставить реакцию, выявляющую пролиферативный маркер – антиген Ki-67. Для его определения следует использовать моноклональные антитела MIB-1 (ткани человека) и MIB-5 (ткани крысы). В случае, когда демаскировка антигенов проведена неправильно, пролиферативные маркеры в положительном контроле не будут обнаружены. Наш опыт показывает, что для оценки эффективности демаскирования подходящим антигеном является виментин (Кирик О. В. [и др.], 2012). Особенно удобно использовать при этом моноклональные мышиные антитела клона V9 и учитывать эффективность демаскирования виментина в составе эндотелия мелких кровеносных сосудов и капилляров. Удобство этой реакции обусловлено в первую очередь тем, что кровеносные сосуды присутствуют в большинстве подвергаемых иммуноцитохимическому исследованию объектов. Таким образом, эндотелий кровеносных сосудов будет выполнять функцию внутреннего положительного индикатора, подтверждающего эффективность теплового демаскирования.